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日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點評

日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點評: 問提問者：網(wǎng)友 | 2018-08-08

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miRNA通過與轉錄本相互作用關閉或抑制基因表達近研究表明們影響了約三成基因miRNA多組織差異表達讓表達圖譜分析成研究重點同時miRNA過表達和抑制也近年來常用研究方法而 Peng Jin(埃默里大學) 我們使用RNA oligo和載體方法對于RNA oligo方法我們采用類似siRNA雙鏈miRNA及anti-miRNA來增加或阻斷特定miRNA活性種方法便于操控細胞培養(yǎng)特定miRNA活性載體方法有著長期改變優(yōu)勢能夠追蹤別細胞我們利用人工shRNA質(zhì)粒或Pol II表達載體來過表達特定miRNA對于miRNA下調(diào)我們要表達shRNA能產(chǎn)生與miRNA前體莖環(huán)結構互補siRNA要使用miRNA海綿(miRNA sponge)能特定miRNA多目標位點表達報告基因 Winston Kuo(哈佛大學) 目前有兩種通用策略:1) 基于載體或病毒miRNA或miRNA反義鏈序列過表達;2) 外源miRNA雙鏈或反義抑制劑轉染方法選擇取決于實驗設計般說來我們傾向于外源試劑轉染載體/病毒策略還依賴Drosha/Dicer酶對轉錄本順序加工且必須通過Exportin 5從核輸出人類癌細胞系曾報道過Drosha和Dicer水平miRNA加工缺陷此外Exportin 5也被認細胞和小鼠模型miRNA生物發(fā)生途徑瓶頸外源過表達飽和Exportin 5從而勝過內(nèi)源小RNA序列極端情況下會引起細胞或動物死亡外源雙鏈轉染直接進入RISC復合物因而繞過了些陷阱當需要持久功能獲得或功能喪失時還需要載體或病毒穩(wěn)定表達穩(wěn)定細胞系必須小心地建立采用病毒滴度測定來避免上述問題 Joshua Mendell(約翰霍普金斯大學) 對于miRNA上調(diào)我們常常構建表達載體制備起來非常簡單我們只擴增miRNA發(fā)夾結構及些側翼序列并直接克隆PCR產(chǎn)物有時候我們也用合成miRNA模擬物來瞬時轉染細胞過表達miRNA 了抑制miRNA我們般使用市場上反義寡核苷酸我們使用Dharmacon和Exiqon抑制劑都獲得了成功些試劑局限于們只能瞬時作用了實現(xiàn)穩(wěn)定抑制我們開始用所謂miRNA海綿們實際上有著多miRNA結合位點捕獲轉錄本能隔離細胞有活性miRNA Silvia Monticelli(瑞士生物醫(yī)學研究所) 我們主要使用慢病毒或反轉錄病毒系統(tǒng)因我們主要研究原代細胞而且需要長時間持續(xù)表達取決于細胞類型我們也使用lipofectamine或Amaxa來瞬時轉: 回答者：網(wǎng)友

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